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預染蛋白Marker知多少
  • 發(fā)布日期:2025-08-21      瀏覽次數(shù):386
    • 預染蛋白Marker是純化好的一些蛋白,通過與染料共價耦聯(lián)后混合在一起,在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到。預染蛋白Marker的出現(xiàn)方便了我們的實驗,這種蛋白分子量標準可以幫助我們在電泳時、電泳后,以及轉膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率——比如,已知垂直電泳最佳分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,如果使用預染Marker就可以預測目標蛋白進入最佳分辨區(qū)時停止電泳以得到最佳分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳;另外在Western Blot轉膜以后可以直接觀察蛋白轉膜是否,還可以在膜上標記蛋白分子量,所以吸引了許多實驗室人員購買預染蛋白標準。值得注意的是,預染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,可能導致一些偏差,所以不太適合精確定位蛋白——不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標蛋白一樣,我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小,最后都需要Western來定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標準一起使用。

       

      蛋白Marker定義和用途

      蛋白Marker即蛋白分子量標準,是一些已知分子量的蛋白質的混合物,像“尺子"一樣用來指示蛋白質條帶的大小。在Western Blot過程中,分子量Marker就像個螺絲釘一樣雖然是其中小小的一環(huán),然而就是這樣一個小細節(jié)對實驗結果有著不可忽視的作用。Marker的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小,只有標準量精確無誤了,實驗結果才有說服力,除此之外,蛋白Marker還有顯示轉膜是否成功、以及蛋白在凝膠上的電泳程度等作用,因此選擇正確的蛋白Marker也是Western Blot實驗成功的必要條件之一。

       

      預染蛋白Marker的分類

      預染蛋白Marker又分單色預染和多色預染,單色預染蛋白Marker通常會利用其中某些條帶加倍濃度加深某些條帶的粗細,來提示其大小的,方便我們快速記憶和區(qū)分各個條帶的大小。而彩色蛋白Marker則用不同的顏色來區(qū)別,更加好辨認。


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